西安疾控中心与清华大学医学院合作：不同灭活方法对新型冠状病毒核酸检出率的影响

摘要

近日，西安市疾病预防控制中心马超锋团队和清华大学医学院郭永团队合作，使用新羿生物的TD-1微液滴数字PCR系统精确定量新冠病毒N基因和ORF 1ab基因，比较了TRIzol 试剂、不同温度的热灭活方法对临床样本中新型冠状病毒基因拷贝数的影响，为实验室选择适宜灭活方法且提高检出率提供了科学依据。该研究结果于5月28日在Journal of Clinical Microbiology 发表（doi:10.1128/JCM.00958-20）。

研究背景

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）目前在全世界多个国家爆发流行，新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测目前是实验室病原检测的金标准。为保护实验室检测人员不受感染，大多数实验室使用灭活标本进行核酸检测。其中常用的灭活方法是56℃水浴中加热30分钟，关于该方法对新冠病毒的RNA量是否有影响，进一步，是否会影响弱阳性标本的检出率，是新冠病毒诊断领域非常值得研究的问题。

方法与结果

该研究收集了61份新型冠状病毒核酸检测阳性的鼻咽拭子标本，采用了以下几种灭活方法：1、TRIzol试剂在室温下灭活10分钟；2、在56℃水浴中加热30分钟；3、高温处理，包括121℃高压20分钟、100℃沸水浴煮沸20分钟、80℃水浴加热20分钟。该研究发现，与原始样品中的RNA量相比，TRIzol处理破坏了47.54%的N基因和39.85%的ORF 1ab基因；56℃30分钟加热处理后，N基因和ORF 1ab拷贝数分别减少48.55%和56.40%；在80℃加热20分钟后，病毒RNA拷贝数下降了50-66%；121℃高压灭菌或100℃煮沸20分钟破坏了绝大部分病毒RNA，几乎未检测到病毒RNA。

图1. TRIzol室温10分钟处理对生物标本中新冠病毒基因拷贝数的影响

图2. 56℃加热30分钟处理对生物标本中新冠病毒基因拷贝数的影响

图3. 80℃、100℃及121℃加热20分钟处理对生物标本中新冠病毒基因拷贝数的影响

研究结论

该研究结果表明，灭活降低了可检测到的病毒RNA数量，尤其对于弱阳性标本，可能导致假阴性结果。相较于热灭活，TRIzol处理对病毒核酸拷贝数影响更小，因此推荐使用TRIzol对临床样本进行灭活处理。

作者介绍 

吴瑞、陈海龙、邢远为该研究的共同第一作者，马超锋和郭永为该研究的共同通讯作者。

参考资料：

Influence of Different Inactivation Methods on Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 RNA Copy Number

https://jcm.asm.org/content/early/2020/05/28/JCM.00958-20