EN

科学研究

 基因表达差异研究

数字PCR可以提供比实时荧光定量PCR更精确的基因差异表达研究,尤其对于那些靶基因表达差异微小的情况,如:mRNA、microRNA、lncRNAs等的表达分析;等位基因的不平衡表达;单细胞基因表达分析;外泌体核酸分子定量分析等。

低丰度DNA模板分子的精确定量

由于绝大部分微液滴中只含单个或不含模板分子,使得低丰度DNA模板分子的扩增不受高丰度模板分子扩增的竞争抑制,与此同时,样本中可能存在的抑制剂也在分配到微液滴的过程中进行了相对稀释,作用于单个微液滴内模板扩增的抑制剂数量大幅降低,因此可应用于诸多临床样本(如血液、尿液粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等)中痕量核酸标记物的检测。一般而言,定量PCR的检测灵敏度约在1%,NGS的灵敏度可达到1%,而数字PCR的检测下限可轻松实现0.01%。

拷贝数变异(CNV)研究

数字PCR直接读取阳性信号,通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数,为拷贝数变异的研究提供了绝对的检测精度。采用数字PCR能够有效对二代测序(NGS)和微阵列比较基因组杂交aCGH等实验结果进行验证,并具有检测周期短、成本低、样本通量高等特点。

甲基化含量鉴定

传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序法 抗体检测法 定量PCR检测法等受限于方法学的问题,不能获得甲基化程度的精确定量,而数字PCR系统通过对样本的微液滴处理及目标分子的绝对拷贝数定量,为甲基化程度的精确定量检测提供了一种可靠的技术。

基因编辑结果验证

CRISPR-Cas9技术的发明,是基因编辑技术的一大突破,但如何验证实验是否成功,仍需要高灵敏度的检测方法,数字PCR技术可以满足这一需求。