dPCR用于遗传性耳聋检测，Anal. Chem., 2018

发表文献网址：https://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acs.analchem.8b01096

近日，清华大学医学院生物医学工程系郭永实验室合作在《Analytical Chemistry》发表题为”Noninvasive and Accurate Detection of Hereditary Hearing Loss Mutations with Buccal Swab Based on Droplet Digital PCR”的研究论文，该研究以数字PCR技术为基础，以口腔拭子为检材，建立了一种精准可靠、灵敏度高、适合在人群中开展耳聋基因突变无创检测的新方法。

耳聋是一种常见的遗传病，遗传异质性高、人群携带率高，诊断价值大，普筛需求大。中国遗传性耳聋的突变基因携带率约4-5%，发病率约为1-3/1000，每年大约新增6万聋儿。目前耳聋突变检测方法有基因芯片、质谱、基因测序等技术，检测样本来源主要是成人静脉血、新生儿足跟血，需要针刺取样，属于侵入性取样方式。基于上述技术开发的遗传性耳聋无创检测方法较少报道。

数字PCR作为一种新兴并快速发展的检测技术，具有单分子检测灵敏度和绝对定量的能力，在生物、医学、农业和检验检疫领域引起广泛关注。本研究基于数字PCR的高灵敏度和绝对定量的优势，以口腔拭子为检测样本，建立了一种耳聋无创检测新方法。该研究对耳聋8个常见突变位点检测的特异性、动态范围、最低检测限等重要参数进行了系统验证，通过无创取样的口腔拭子对方法的准确性和临床适用性进行了研究，见图1。研究显示，该方法特异性为100%，最低检测限为5拷贝，在10-105拷贝范围内定量的准确性和重复性较好，并实现了对药物性耳聋低至1%的突变异质率精准定量检测，所有临床样本检测结果与Sanger测序一致率为100%。

图1.耳聋基因突变无创检测方法示意图

该研究对口腔拭子在不同保存条件下的有效期进行了研究，结果显示口腔拭子无论是在常温还是-20℃保存，经过长达90天的保存仍能被数字PCR技术准确检出，这为口腔拭子在常温运输和保存后进行检测提供了科学基础。基于数字PCR对口腔拭子样本进行检测，样本易得，灵敏度高，准确可靠，具有良好的临床适用性和规模化筛查应用潜力。

已毕业博士生王芳为本文第一作者，郭永研究员对该研究进行了合作指导，这项研究得到了解放军总医院、博奥生物集团有限公司和北京新羿生物科技有限公司的大力支持。本课题得到国家自然科学基金委、中央公益性科研机构基金、企业横向合作课题等的经费资助。

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https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b01096 

来源：清华新闻网