灵敏，定量！新羿生物新型冠状病毒(2019-nCoV)数字PCR 应用方案

新型冠状病毒肺炎诊断的挑战

截止2020年1月28日20时05分，新型冠状病毒肺炎国内确诊病例为4629例，疑似6973例，治愈71例，死亡106例，死亡率低于SARS，但传播能力可能更强，导致疫情传播速度较快，给疾病防控工作带来极大的挑战。新型冠状病毒疫情日益严峻，此刻的棘手问题之一就是检测新型冠状病毒的试剂稀缺，使得很多患者不能被第一时间确诊和收治，导致后续治疗工作推进缓慢。

1月28日晚，六家公司的新型冠状病毒荧光PCR检测试剂盒或基因测序系统获国家药品监督管理局应急审批通过，这也意味着针对本次疫情在病原检测和确认方面取得了重大突破，可以有力推动对疑似疫情感染患者的甄别工作。

在新型冠状病毒肺炎诊断过程中，需要进一步解决的问题：

1）有接触史尚无症状者，需要排查是否被感染；

2）荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本，如何判定阴性还是阳性；

3）患者治疗过程中监测病毒载量的变化，用于指导治疗；

4）病人体内病毒转阴的复核，用于指导出院。

同时，对于荧光PCR检测试剂盒开发来说，提供准确定量的参考品可以为试剂盒质量保驾护航。

数字PCR的潜在作用

1）用于有接触史尚无症状者排查：基于数字PCR的高灵敏度，检测病毒携带状况；

2）用于新型冠状病毒疑似患者诊断复核：基于数字PCR的高灵敏度和高准确性，可用于荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本判定。

3）用于新型冠状病毒感染患者病毒载量动态观察：基于数字PCR的绝对定量能力，可为临床医生提供更为准确的病原体载量信息，协助判断病情并及时调整治疗策略。

4）可用于治疗后患者体内病毒转阴的复核，用于指导出院。

5）标准参考物质的制备：数字PCR是制备标准参考物质定量的重要方法，为荧光PCR试剂盒提供可靠的标准物质。

新羿生物数字PCR试剂盒设计

新羿生物在国家CDC的指导下与清华大学生物医学工程系等单位协力合作，针对公布的新型冠状病毒序列，正在开发数字PCR法2019-nCoV核酸检测试剂盒，该试剂盒采用创新的RNA一步法逆转录数字PCR技术，可对样本中的2019-nCoV进行高灵敏与准确定量检测。参考国家CDC和WHO的指南，针对2019-nCoV的多个区域进行检测，增加检测的特异性并减少漏检错检。试剂盒内设有内参基因，可对采样、提取和PCR扩增等步骤进行质控，确保检测过程的精准可靠。

新羿生物TD-1数字PCR平台特点

1）合规性：TD-1系统已取得国家医疗器械上市许可；

2）通量高：一次PCR可以完成96样本；

3）方便性：液滴直接于8联排管中生成，生成之后无须手工移液；PCR扩增完成后，直接放入生物芯片分析仪中，即可进行信号读取与分析；

4）安全性：液滴扩增与检测流程无开盖操作，且检测后液滴储存于芯片内置废液槽中，不流经仪器内部，完全避免气溶胶污染导致的假阳性结果，符合临床对检测安全性的要求。

新型冠状病毒简介

2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”，因2019年武汉病毒性肺炎病例而被发现，2020年1月12日被世界卫生组织命名，其中2019代表最早出现的年份，n代表Novel(新的)，Cov代表Coronavirus(冠状病毒)。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。冠状病毒是一个大型病毒家族，部分冠状病毒以鼻塞、流涕、打喷嚏等“普通感冒”症状为主，但是SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV三种冠状病毒具有较高的致病性。

数字PCR

数字PCR技术是第三代PCR技术，是一种新的核酸检测与定量方法，其将模板分子稀释并平均分配到数万个独立反应腔室后进行PCR扩增，通过PCR终点信号的“有或无”来实现检测与绝对定量。

具有如下特性：

1）高灵敏度，可实现单分子级检测；

2）定量准确，不依赖标准物质与标准曲线；

3）高稳定性，善于在复杂背景模板的干扰下对罕见的靶标进行检测，且对扩增抑制剂的耐受性好。

数字PCR的特性还体现在：数字PCR的检测与定量过程受扩增效率的影响较小，因此对于新型病毒在靶标位置可能出现的变异有一定耐受性，可确保检出的稳定性与定量的精准性。同时，通过数字PCR检测图像的变化，提示引物探针靶标区域可能出现的变异并保留样本，会有助于后续的病毒变异研究。

在此次新型冠状病毒疫情防控中，新羿生物会与奋战在疫情前线的医护英雄们一起，携手共渡难关！非常欢迎同行一起合作，为疫情防控提供优秀解决方案。请联系：

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