学术文章丨北京佑安医院科研团队建立丁肝病毒检测新方法

发布日期：2022-09-05

乙肝病毒（HBV）感染者部分会同时感染丁肝病毒（HDV），对HDV的及时、准确检测是制定科学治疗方案和实现临床治愈的前提。首都医科大学附属北京佑安医院任锋教授团队基于数字PCR平台上开发了一种高敏可靠的HDV检测方法，论文发表在国际期刊《Clinical and Translational Gastroenterology》上。

灵敏度和线性范围验证

研究者以含有HDV全基因序列的质粒和WHO的HDV标准品为检测对象，验证和对比了数字PCR法和RT-PCR法的检测下限、定量下限和线性范围。结果显示，数字PCR法对含HDV基因序列质粒的检测下限是10⁰拷贝/微升（图a），线性范围是10⁰-10⁶拷贝/微升（图b）；对WHO的HDV标准品的检测下限是5.75 IU/毫升，在5.75-5750 IU/毫升浓度范围内有比较好的线性关系（图d）。RT-PCR法与之相对应的分别是质粒检测下限10³拷贝/微升，线性范围是10³-10⁶拷贝/微升（图c），WHO标准品的检测下限是575 IU/毫升（图d）。

研究者又以30个HBV和HDV共感染者和14个HBV单独感染者的共44个血液样本为研究对象，分别验证了数字PCR法和RT-PCR法的检出率（HDV感染阳性是以抗HDV的IgG的Elisa检测结果为判断标准）。实验结果显示，30个HDV阳性样本中，数字PCR法检出24个，RT-PCR法检出10个（图a）；14个HBV单独感染样本两种方法都未检出（图b）。这些感染者都接受了抗病毒药物治疗，这可能影响了HDV核酸的检出率。

对四种不同HBV相关疾病患者样本的HDV检测

研究者对各182名慢性乙肝（CHB）、肝硬化（LC）、肝细胞癌（HCC）和肝衰竭（LF）患者，共728个样本进行了抗HDV的IgG和IgM检测，共检出了26个抗HDV 的IgG阳性，其中9个抗HDV的IgM阳性。然后，研究者又分别用RT-PCR和数字PCR对26个抗HDV 的IgG阳性样本进行了HDV的核酸检测，结果显示数字PCR检出了9个阳性，与抗HDV的IgM检测结果一致；而RT-PCR法检出4个阳性（见下图）。

从实验结果可以看出，相较于RT-PCR法，数字PCR法有更高的检出率，而且与IgM抗体检测有着较高的一致性。原因可能是人体的IgM一般在病毒感染的早期产生，中期消失被IgG取代，与病毒核酸在人体内存在周期有较高的重叠。此外，不同HBV相关疾病患者样本的HDV核酸不同检出率也表明HDV和HBV合并感染可显著加速肝病的进展。

数字PCR法检测结果的重复性

研究者还对数字PCR法进行了不同样本的批次间重复性和批次内重复性验证，结果都显示了比较好的稳定性，结果请见下图：

总结

任峰教授科研团队研发的数字PCR HDV检测方法展现了极高的检测灵敏度和稳定性，并且进一步提示HDV和HBV合并感染与HBV相关疾病发展的相关性。新羿生物祝贺任峰教授取得的研究成果，并期待数字PCR技术在更多科学研究中发挥作用！

原文链接：https://doi.org/10.14309/ctg.0000000000000509